標(biāo)簽：搖瓶 緩沖液 微生物 種子制備

搖瓶種子即接種在搖瓶?jī)?nèi)用于搖瓶發(fā)酵試驗(yàn)或發(fā)酵罐生產(chǎn)的微生物菌種。用于接種傳代第一代的種子稱為“母瓶"，用于接種傳代第二代的種子就叫做“子瓶"。“母瓶"和“子瓶"均可應(yīng)用在微生物發(fā)酵罐進(jìn)行規(guī)模擴(kuò)培傳代培養(yǎng)。



一、培養(yǎng)基制備
在搖瓶中進(jìn)行種子制備的主要目標(biāo)是培養(yǎng)強(qiáng)生長(zhǎng)活性的營(yíng)養(yǎng)菌體，所以在配制培養(yǎng)基階段必須以滿足菌體生長(zhǎng)要求為目的。比如在培養(yǎng)基中添加足量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括碳、氮源、緩沖液、無機(jī)鹽和生長(zhǎng)因子等物質(zhì)。在培養(yǎng)基中添加緩沖液的主要作用是調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中的PH值，是培養(yǎng)基的PH環(huán)境長(zhǎng)期處于穩(wěn)定狀態(tài)。常用的PH調(diào)節(jié)劑主要有磷酸鹽緩沖液、PBS緩沖液等。培養(yǎng)基分裝完成，封口后需要置于高壓滅菌鍋中進(jìn)行高壓滅菌。 滅菌完成后緩慢降壓，防止因氣壓驟降造成培養(yǎng)基沖擊瓶塞。

二、種子接種
在進(jìn)行搖瓶種子接種時(shí)，普遍采用的是斜面法或米孢子粒計(jì)數(shù)接入的方式。 如果采用米孢子粒計(jì)數(shù)接入接種法進(jìn)行接種的缺陷在于，接種量的一致性很難掌握，這樣容易導(dǎo)致?lián)u瓶種子的質(zhì)量穩(wěn)定性差。因此，對(duì)于接種量較為敏感的菌種，一般會(huì)采用懸液接種法進(jìn)行接種。懸液接種法是用蒸餾水將細(xì)胞或微生物孢子洗脫成為混合液，然后按固定體積數(shù)量接種在搖瓶種子培養(yǎng)基中的一種接種方法。懸液接種法增加了接種數(shù)量的均一、穩(wěn)定性。 

三、振蕩培養(yǎng) 
搖瓶種子采用的振蕩培養(yǎng)搖床主要有旋轉(zhuǎn)式振蕩和往復(fù)式振蕩兩種。正常情況下生產(chǎn)抗生素類的企業(yè)使用較多的是旋轉(zhuǎn)式振蕩搖床。旋轉(zhuǎn)式振蕩搖床由于在主軸和從動(dòng)軸間會(huì)有25mm-50mm左右的偏心距產(chǎn)生，所以在振蕩作用時(shí)更有利于氣體交換。部分特殊的微生物也會(huì)使用振蕩培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。 

四、收獲保存 
搖瓶種子在培養(yǎng)完成后盡量立即使用。如果臨時(shí)用不到的可放在4℃冰箱中保存，但是保存期以不超過3天為宜。為避免影響生產(chǎn)質(zhì)量，這類冷藏處理的種子多數(shù)用于搖瓶發(fā)酵試驗(yàn)或小型發(fā)酵罐實(shí)驗(yàn)，一般不直接做生產(chǎn)用種子。

五、影響搖瓶種子的質(zhì)量
影響微生物搖瓶種子質(zhì)量的因素主要有：菌體濃度、培養(yǎng)基成分、接種密度、設(shè)備轉(zhuǎn)速等。 

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